Nature Protocols在線發表了中國科學院分子細胞科學卓越創新中心陳玲玲研究組撰寫的研究論文（Screening circular RNAs with functional potential using the RfxCas13d/BSJ-gRNA system）。該研究闡釋了研究組建立的基於CRISPR-Cas13技術的環形RNA篩選新方法。
環形RNA是一類共價閉環的單鏈RNA，細胞內大多數環形RNA是由mRNA前體的外顯子通過反向剪接形成。除反向剪接位點（BSJ）外，環形RNA在序列上與其同源的線形RNA在一級序列上完全一致，因此，在研究環形RNA功能時如何將其與同源線性RNA的功能區分開來是該領域的難題之一。陳玲玲研究組前期開發並優化了基於CRISPR-Cas13的RNA編輯技術，能夠特異性敲除靶標環形RNA，而不影響其同源線性RNA的表達，並應用在環形RNA的大規模功能篩選上（Li et al., Nature Methods, 2021）。基於CRISPR-Cas13在環形RNA功能研究上的技術成果，研究組受Nature Protocols邀請，論述該技術的實驗方法和流程以期推動該技術在環形RNA功能研究領域的應用。
在該實驗方法中，科研人員闡釋了環形RNA BSJ位點的前導RNA（gRNA)）文庫設計和構建、RfxCas13d穩定表達細胞系構建、細胞水平和體內水平的功能性環形RNA篩選以及篩選結果的計算分析流程等。此外，研究也闡明了實驗過程中可能遇到的問題與注意事項。該方法為環形RNA的功能研究提供助力，並為剖析環形RNA奠定新的技術基礎。
研究工作得到科技部、中科院和國家自然科學基金的支持。
基於CRISPR-Cas13技術的環形RNA功能篩選流程
來源：中國科學院分子細胞科學卓越創新中心
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