鑽石舞台

既然都講了乙酰化了，那就索性講講乙酰化研究中，大概都做些什麼實驗吧。夏老師就隨便搜了一篇8.881分的Mol Ther Nucleic Acids，來給你們看看一般的乙酰化研究，會做點啥。

這篇和別的文章開頭都差不多，首先是發現在雙側卵巢切除的骨質疏鬆小鼠中，N-acetyltransferase 10 (N-乙酰轉移酶10，NAT10)表達會下降，整體mRNA的乙酰化程度也會下降。

而在骨質疏鬆的小鼠中過表達NAT10，則會抑制骨質流失。如果用NAT10的抑制劑的話，則會加重骨質流失：

相當於做了一個驗證基因和表型之間關係的互補實驗。

接着他們做了一個骨髓來源間充質幹細胞 (BMSCs)的分選，分離出來的 BMSCs 可以在體外分化成成骨細胞、脂肪細胞和軟骨細胞。他們用了兩種培養基，一種是成骨培養基 (OM)，另一種是增殖培養基 (PM) 。在成骨培養基中，生成了鈣結節。在BMSCs 成骨分化早期，NAT10 蛋白水平和總 RNA的乙酰化水平都有所升高：

這裡他們分析總RNA乙酰化水平的實驗是Dot blot analysis，斑點印記：

其實有點類似於Northern Blot，就是把RNA點到尼龍膜上孵育，然後用紫外做交聯。交聯後，用乙酰基的抗體進行顯影：

用這個來分析總RNA的乙酰化水平。

接着他們做的是另一個乙酰化研究相關的實驗，也就是acRIP-seq，乙酰化RIP的二代測序，這個主要是用來分析mRNA具體的乙酰化位置的，也是用乙酰基抗體去拉下來RNA，進行的測序：

通過聚類，找出可能與成骨相關的基因，然後再進一步進行驗證，他們用的就是acRIP-qPCR，這個主要就是看各個mRNA的乙酰化程度了，在這裡他們篩選到的，就是RUNX2：

由於乙酰化可能會維持mRNA的穩定性，所以敲除NAT10後，RUNX2的乙酰化程度降低，mRNA穩定性也降低。所以在這裡他們用的驗證方式，就是敲減NAT10後（抑制乙酰化）後，過表達RUNX2（做為RUNX2的mRNA損失的回補），來驗證表現的變化：

最後獲得了這樣的示意圖：

雖然不算特別嚴謹，但是起碼在乙酰化研究中，常用的實驗，大家應該也看懂了吧。要看這篇文獻，可以自己去PubMed上下搜一下。或者在評論區進行評論，就發給你們PMID號。實在不行就回復「公克」（不要在評論區回復），要麼就直接星球上見（當然，進不去也無所謂）。好吧，今天就先給你們策到這裡吧，祝你們心明眼亮。