鑽石舞台

近來，有文章報道了基於血液檢測AD特異性Aβ和P-tau的一系列新技術，其因檢測靈敏度高，與AD嚴重程度高度一致而受到廣泛關注。基於此，來自新加坡國立大學的研究團隊在《J Neurol Neurosurg Psychiatry》雜誌上發表重要綜述，系統介紹了基於外周血液標本檢測AD生物標記物的新興技術，包括免疫沉澱質譜（IP-MS）、單分子陣列和中尺度免疫分析平台，並對其用於識別Aβ斑塊、神經纏結和其他AD相關病理的最新報道進行了系統回顧。

基於血液的澱粉樣蛋白測量新技術

近年來，外周血Aβ檢測的新平台和免疫分析方法的開發發展迅速。與傳統分析技術相比，這些方法提高了檢測靈敏度，並且能夠測量與AD病理相關的Aβ變體。Aβ陽性和Aβ陰性組別比較如表1所示，曲線下面積（AUC）用以評估外周血液Aβ在檢測腦組織Aβ升高方面的診斷性能。

Simoa免疫分析是一種數字ELISA，通過以數字方式確定分析物濃度，而不測量總模擬信號。簡單地說，當順磁珠上形成免疫複合物後，磁珠被轉移到數千個孔中，每個孔的大小只能容納一個磁珠。通過將單個酶產生的熒光團限制在極小的體積內，可獲得較高的熒光產物濃度。因此，即使珠子上僅存在單個複合物，也可檢測到可讀信號。

通過分析儀計算含有酶標記珠的孔和含有珠的孔的數量，通過每個珠數的平均酶標值和標準曲線計算目標分析物的濃度。雖然Simoa具有較高的靈敏度，但應考慮檢測器捕獲過程中抗體組合等問題，儘量避免噪音信號，最大限度地提高分析性能。

該技術使用特異性抗體通過免疫沉澱（IP）從血漿中分離和富集Aβ肽段，然後利用高靈敏度質譜（MS）鑑定和相對定量單個Aβ亞型，包括Aβ42、Aβ40、Aβ38或APP669-711。雖然該方法的基本原理相似，但在應用上存在巨大差異。

Kaneko和Nakamura等人採用基質輔助激光解吸/電離飛行時間質譜（MALDI-TOF/MS），而Ovod和Keshavan等人採用液相色譜-串聯質譜（LC-MS/MS）。Pannee等人使用MALDI-TOF/MS Aβ譜分析，然後使用LC-MS/MS來確認Aβ肽的特性。與其他質譜方式相比，LC-MS/MS為每個片段肽生成多個質譜，並將這些質譜與用於蛋白質鑑定的數據庫進行比較。在MALDI-TOF/MS中，僅生成一個質譜，用於匯編所有肽的質量。

因此，MALDI-TOF/MS提供了更快的分析和更高的讀入量，更適合大規模研究。然而，MALDI-TOF/MS在蛋白質鑑定中缺乏對照數據依賴的的真實序列，導致其檢測的準確性和可靠性較低。

Elecsys免疫分析是一種電化學發光（ECL）方法，在完全自動匹配的裝置中執行。首先，將樣品與目標Aβ亞型的生物素化抗體和釕標記檢測抗體混合，以形成複合物。接下來，添加鏈霉親和素包裹的磁珠，與生物素化抗體結合。測量時，將反應混合物吸入測量池，在測量池中，磁珠被捕獲到電極表面。通過向電極施加電壓，致使釕絡合物發射光子，並由光電倍增管測量得出結果，最後通過校準曲線確定分析物的濃度。

表1血液澱粉樣蛋白與腦澱粉樣蛋白病理的關係

其他的方法還有等離子胞外信號放大、微電極傳感系統等，均可靈敏的檢測血液中的AD生物標記物。重要的是，血源性P-tau也是AD病理生理檢測一個有潛力的標記物，對於P-tau和Aβ的檢測方法的更迭可以更靈敏的診斷AD早期病理進程，對AD的診斷和治療提供極大的幫助。

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